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人白細(xì)胞介素1受體I 型 Human IL-1 sRI

人白細(xì)胞介素 1 可溶性受體 I 型 ELISA 試劑盒
產(chǎn)品編號：SEKH-0005
適用于人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本

背景介紹：
IL-1 家族受體包括 10 個(gè)成員，大部分受體胞外區(qū)含有 3 個(gè)類似免疫球蛋白 (IgG)的片段。IL -1RI、IL-1RII和 IL-1RIII 是可以與 IL1α及 IL-1β結(jié)合的受體，IL-l 是一種 T 淋巴細(xì)胞激活因子，主要產(chǎn)生于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等，是調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫的主要致炎性細(xì)胞因子，誘導(dǎo) T 和 B 細(xì)胞分化和增殖，亦誘導(dǎo)抗原特異性殺傷細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的增殖，在慢性炎癥和自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用。人 IL-l RI 基因編碼 549 個(gè)氨基酸，其中胞外區(qū) 316 個(gè)氨基酸．單次跨膜區(qū) 20 個(gè)氨基酸和胞內(nèi)區(qū) 213 個(gè)氨基酸，分子量為 80 kDa，含有 3 個(gè)免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域。IL-1RI，IL-1RII 及參與活性調(diào)節(jié)的 IL-lR 輔助蛋白，三者均為膜受體，共同參與和 IL-1 的結(jié)合及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，IL-1RAcp 本身不與 IL-1 結(jié)合， 但在 IL-1 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中起關(guān)鍵作用。 

檢測原理：
Solarbio (Solarbio ®) ELISA 試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。將抗人 IL-1 RI 單克隆抗體包被在酶標(biāo)板上；分別加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和預(yù)稀釋的樣本，標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的人 IL-1 RI 會與酶標(biāo)板上的包被抗體充分結(jié)合；洗板后加入生物素化抗人 IL-1 RI 抗體，該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本中的人 IL-1 RI 發(fā)生特異性結(jié)合；洗板后加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，生物素與鏈霉親和素會發(fā)生高強(qiáng)度的非共價(jià)結(jié)合；洗板后加入顯色劑底物 TMB，若反應(yīng)孔中樣品存在不同濃度的人 IL-1 RI，則 HRP 會使無色 TMB 變成不同深淺（正相關(guān)）的藍(lán)色物質(zhì)，加入終止液后反應(yīng)孔會變成黃色；后，在λmax=450 nm（OD=450 nm）處測定反應(yīng)孔樣品吸光度（OD），樣本中的人 IL-1 RI 濃度與OD 成正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計(jì)算出樣本中人 IL-1 RI 的濃度。

注意事項(xiàng)：
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持*。
5. 為避免交叉污染，請?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑料容器。. 6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時(shí)，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。 

安全提示：
試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時(shí)請帶上手套并注意防護(hù)；在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時(shí)，請按國家生物實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。

自備實(shí)驗(yàn)器材（不提供，可代購）
1． 酶標(biāo)儀（主波長 450nm，參考波長 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板機(jī)或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 雙蒸水，去離子水，量筒等
6． 稀釋用聚丙烯試管

樣本收集及儲存：
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：
將細(xì)胞培養(yǎng)基移無菌離心管，在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時(shí)內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融。
2. 血清樣本：
室溫血液自然凝固 20 min 后，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時(shí)內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀，請?jiān)俅坞x心，避免反復(fù)凍融。
3. 血漿樣本：
將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際要求選擇 EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 20 min，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24小時(shí)內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融。

※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本，以免影響檢測結(jié)果；如果樣本中的靶標(biāo)物檢測濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的值，請將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測，建議正式實(shí)驗(yàn)前做預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定稀釋倍數(shù)。

 人白細(xì)胞介素1受體I 型 Human IL-1 sRI