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纖維素酶（CL）測定試劑盒  微量法

操作步驟：

一、樣品測定的準(zhǔn)備：

1、細(xì)菌或細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲冰浴破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％，超聲 3S 秒，間隔 10S，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：稱取約 0.1g 組織加入 1mL 提取液，冰浴中勻漿。8000g ，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

二、加樣表和測定步驟：試劑名稱（μL） 對照管 測定管 標(biāo)準(zhǔn)管試劑一 50 50 - 試劑二 200 200 - 雙蒸水 50 50 - 樣本 50 - 煮沸的樣本 50 - 混勻，40℃準(zhǔn)確水浴 30min，取出后立即放入沸水中煮沸 15min,得糖化液 混勻，540nm 處蒸餾水調(diào)零，測定吸光值 A，樣品管計算ΔA=A 測定管-A 對照管。標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：540nm 處蒸餾水調(diào)零，讀標(biāo)準(zhǔn)管吸光值 A。以濃度（y）為縱坐標(biāo)，吸光度 A（x）為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

纖維素酶（CL）測定試劑盒  微量法

CL 活力計算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA 帶入公式中（x）計算樣品濃度 y（mg/mL）。 1、按照蛋白濃度計算單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。 CL 活力（U /mg prot）＝1000×y×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T=233×y÷Cpr 2、按樣本鮮重計算單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。 CL 活力（U/g 鮮重）＝1000×y×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T =233×y÷W 3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。 CL 活力（U/10 4 cell）＝1000×y×V 反總÷（500×V 樣÷V 樣總）÷T =0.467×y 1000：1mg/mL=1000ug/mL；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.35mL； V 樣：加入樣本體積， 0.05 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度， mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

纖維素酶（CL）測定試劑盒  微量法

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；試劑一：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；試劑三：液體 13mL×1 瓶，4℃保存；標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，4℃保存，含 10mg 無水葡萄糖（干燥失重<0.2%），臨用前加入 1ml 蒸餾水溶解，配制成 10mg/ml 葡萄糖溶液備用，4℃可保存 1 周，或者用飽和苯甲酸溶液溶解，可保存更長時間。