產(chǎn)品名稱:多酚氧化酶(PPO)活性檢測試劑盒
產(chǎn)品型號:BC0195
產(chǎn)品特點:多酚氧化酶(PPO)活性檢測試劑盒測定意義:PPO(EC1.10.3.1)主要存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是一種含銅的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌,從而引起褐化,與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關
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多酚氧化酶(PPO)活性檢測試劑盒
產(chǎn)品名稱:多酚氧化酶測定試劑盒 (微量法)
產(chǎn)品英文名:Micro Polyphenol Oxidase (PPO) Assay Kit
產(chǎn)品貨號:BC0195 產(chǎn)地:北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓
產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣 產(chǎn)品商標:solarbio
保存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價格:1000
庫存狀態(tài):現(xiàn)貨
關鍵字:多酚氧化酶測定試劑盒|微量法|
簡要介紹:
PPO能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌,后者在525nm有特征光吸收。
PPO(EC1.10.3.1)主要存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是一種含銅的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌,從而引起褐化,與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關。
產(chǎn)品詳細描述
商品貨號: | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價: | 選擇規(guī)格 |
BC0195-100管/48樣 | Solarbio | 100管/48樣 | 1000.00元 |
產(chǎn)品簡介:
PPO 主要存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是一種含銅的氧化酶,能使一元酚和二元 酚氧化產(chǎn)生醌,從而引起褐化,與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關。 PPO 能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌,后者在 410nm 有特征光吸收。
試驗中所需的儀器和試劑:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研 缽、冰和蒸餾水。
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存,用前混勻即可;
試劑一:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃保存。
操作步驟:
一、粗酶液提?。?/span>
1、收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液,超聲 波破碎細菌或細胞(功率 20%,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復 30 次);8000g 4℃離心 10 分鐘,取 上清,置冰上待測。
2、稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。
二、測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長 410nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定(在 EP 管中依次加入下列試劑)
試劑名稱(μl) | 測定管 | 對照管 |
試劑一 | 200 | 200 |
試劑二 | 50 | 50 |
樣本 | 50 | |
煮沸的樣本 | 50 | |
37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)中準確水浴 10min 后,迅速放入沸水中加熱 10min |
充分混勻,5000g,常溫離心 10min,收集上清,取 200μL 微量玻璃比色皿或 96 孔板中,410nm 處檢測測定管和對照管吸光度,計算ΔA=A 測定-A 對照。
PPO活性計算:
a.用微量玻璃比色皿測定的計算公式如下
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每分鐘每 mg 組織蛋白在反應體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.01 定義為一個 酶活力單位。
PPO(U/mgprot)=提取液總體積(1000μL)÷樣本體積(50μL)÷反應時間(10min)÷0.01×(A 測 定-A 對照)÷蛋白濃度(mg/mL)=200×ΔA÷蛋白濃度(mg/mL) 此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每分鐘每 g 組織在反應體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.01 定義為一個酶活力 單位。
PPO(U/g 鮮重)=提取液總體積(1000μL)÷樣本體積(50μL)÷反應時間(10min)÷0.01×(A 測 定-A 對照)÷樣本鮮重(g/mL)=200×ΔA÷樣本鮮重(g/mL)
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每分鐘每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.01 定義為 一個酶活力單位。
PPO(U/104 cell)=提取液總體積(1000μL)÷樣本體積(50μL)÷反應時間(10min)÷0.01×(A 測 定-A 對照)÷500=0.4×ΔA
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每分鐘每 mg 組織蛋白在反應體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.005 定義為一個 酶活力單位。
PPO(U/mgprot)=提取液總體積(1000μL)÷樣本體積(50μL)÷反應時間(10min)÷0.005×(A 測定-A 對照)÷蛋白濃度(mg/mL)=400×ΔA÷蛋白濃度(mg/mL) 此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每分鐘每 g 組織在反應體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.005 定義為一個 酶活力單位。
PPO(U/g 鮮重)=提取液總體積(1000μL)÷樣本體積(50μL)÷反應時間(10min)÷0.005×(A 測定-A 對照)÷樣本鮮重(g/mL)=400×ΔA÷樣本鮮重(g/mL)
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每分鐘每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中(300μL)使 410nm 處吸光值變化 0.005 定義為 一個酶活力單位。
PPO(U/104 cell)=提取液總體積(1000μL)÷樣本體積(50μL)÷反應時間(10min)÷0.005×(A 測定-A 對照)÷500=0.8×ΔA
注意事項:
不同樣本的多酚氧化酶的反應溫度略有差別,可在 25-37℃之間進行調(diào)節(jié)。
相關文獻:
《Effectof L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus)》 作者:Beibei Li,Yang Ding,Xiuli Tang,Guoyi Wang,Shujuan Wu,Xianxian Li,Xiaofei Huang,Tongtong Qu,Jifeng Chen 期刊:Food and Bioprocess Technology 影響因子:3.032 PMID:
《MTA1 promotes the invasion and migration of pancreatic cancer cells potentially through the HIF-α/VEGF pathway》 作者:B Li, Y Ding, X Tang, G Wang, S Wu, X Li 期刊:Journal of Receptor and Signal Transduction Research. 影響因子:2.998 PMID:30396299
多酚氧化酶(PPO)活性檢測試劑盒
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