β-半乳糖苷酶(β-GAL)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品名稱: β-半乳糖苷酶(β-GAL)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品英文名:  β-galactosidase（β-GAL）Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC2580           產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣             產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：750
庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字: β-半乳糖苷酶檢測(cè)試劑盒|β-GAL檢測(cè)試劑盒|β-半乳糖苷酶|試劑盒

簡要介紹：
β-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，能夠催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷鍵水解，此外還具有轉(zhuǎn)半乳糖苷的作用。β-GAL不僅可為植物的快速生長釋放儲(chǔ)存的能量，還能在正常的多糖代謝、細(xì)胞壁組分代謝以及衰老時(shí)細(xì)胞壁降解過程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖殘基的水解，釋放自由的半乳糖。
β-GAL 分解對(duì)-硝基ben-β-D-吡喃半乳糖苷生成對(duì)-硝基ben酚，后者在400nm 有大吸收峰，通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算β-GAL 活性。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入5mL 蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二：液體15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體80mL×1 瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)液：液體1ml×1支，4℃保存，5μmol/ml對(duì)硝基ben酚溶液。

產(chǎn)品說明：
β-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，能夠催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷鍵水解，此外還具有轉(zhuǎn)半乳糖苷的作用。β-GAL不僅可為植物的快速生長釋放儲(chǔ)存的能量，還能在正常的多糖代謝、細(xì)胞壁組分代謝以及衰老時(shí)細(xì)胞壁降解過程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖殘基的水解，釋放自由的半乳糖。
β-GAL 分解對(duì)-硝基ben-β-D-吡喃半乳糖苷生成對(duì)-硝基ben酚，后者在400nm 有大吸收峰，通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算β-GAL 活性。

需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液提取：

1. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30 次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
3. 標(biāo)準(zhǔn)液的處理：用試劑二將標(biāo)準(zhǔn)液稀釋200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/ml.

• 測(cè)定步驟
• 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長400nm，蒸餾水調(diào)零。
• 樣本測(cè)定，（在EP管或96孔板中依次加入下列試劑）：

充分混勻，室溫靜置2min后， 400nm處測(cè)定吸光值A?！?/span>A=A測(cè)定管-A對(duì)照管

β-GAL 活性計(jì)算：
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度（x）和濃度（y，nmol/ml）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，將△A帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，計(jì)算樣品生成的產(chǎn)物量（nmol/ml）。

1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg 組織蛋白每小時(shí)產(chǎn)生1nmol 對(duì)-硝基ben酚定義為一個(gè)酶活力單位。
β-GAL 活力(nmol/h /mg prot)=(y×V 反總)÷(V 樣×Cpr)÷T
=20×y÷Cpr
需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。

1. 按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g 組織每小時(shí)產(chǎn)生1nmol 對(duì)-硝基ben酚定義為一個(gè)酶活力單位。
β-GAL 活力(nmol/h /g 鮮重)＝(y×V 反總)÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T
=20×y ÷W

1. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每1 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每小時(shí)產(chǎn)生1nmol 對(duì)-硝基ben酚定義為一個(gè)酶活力單位。
β-GAL 活力(nmol/h /10⁴ cell)= (y×V 反總)÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T
=0.04×y
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g； 500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h。


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