1. 磷酸鹽緩沖液
優(yōu)點:①易于配制成各種濃度 ;②pH值范圍寬;③pH受溫度的影響?。?/div>
缺點:①易與常見的鈣、鎂、重金屬離子形成沉淀;②抑制某些生化過程;
2. Tris緩沖液
Tris緩沖液在生物化學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用。它是弱堿,通常在“中性”范圍內(nèi)使用。Tris-HCl緩沖:pH = 7.5 ~ 8.5;三磷酸緩沖液:pH = 5.0 ~ 9.0。
除TRIS - hcl外,TRIS還有多種衍生化緩沖:
TBS=Tris-HCl+ NaCl+KCl,常用來清洗免疫染色組織或Western blotting中的Western blotting膜;
TBST=Tris-HCl+NaCl+tween20,一種常用于Western Blotting的膜緩沖液;
TE=Tris-HCl+EDTA,對DNA堿基具有保護作用,常用于DNA的穩(wěn)定和儲存;
TAE=Tris堿+乙酸+EDTA,是一種廣泛應(yīng)用于短片段DNA電泳的緩沖體系;
TBE=三堿基+硼酸+EDTA,適用于長期DNA電泳,對小片段有較好的分離效果。
優(yōu)點: ①因為Tris堿的堿性較強,所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液;②對生物化學(xué)過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。
缺點:①緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1;②溫度效應(yīng)大,溫度變化對緩沖液pH值的影響很大,所以一定要在使用溫度下進行配制,室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃~4℃。 ③易吸收空氣中的CO2,所以配制的緩沖液要蓋嚴密封。④此緩沖液對某些pH電極發(fā)生一定的干擾作用,所以要使用與Tris溶液具有兼容性的電極。
3. Good’s緩沖液
在 1960 年代中期,N.E.Good鑒于一般的緩沖液系統(tǒng)并不適合生化實驗所使用,必須用人為設(shè)計和人工合成的方法來找到專門用于生命科學(xué)研究的特定的緩沖體系,這些緩沖體系們都具有以下特質(zhì):
1.pKa 在6~8 之間;2.在水溶液中有高溶解度;3.鹽效應(yīng)很?。?.不易被運送通過細胞膜;5.不易受溫度、離子組成、濃度等因素影響解離度;6.不會與金屬離子形成錯合物,或錯合物不沉淀、不干擾生物活性;7.化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。
Good’s緩沖液的主要優(yōu)點是不參加和不干擾生物化學(xué)反應(yīng)過程,對酶化學(xué)反應(yīng)等無抑制作用,所以它們專門用于細胞器和極易變性的、對pH敏感的蛋白質(zhì)和酶的研究工作。
其缺點是:①價格昂貴,②對測定蛋白質(zhì)含量的雙縮脲法和Lowry法不適用,因為它們會使空白管的顏色加深。
4.甘氨酸緩沖液
甘氨酸緩沖液pH值范圍廣,應(yīng)用范圍廣。pH值范圍為2.0~11.0。